紫外透光器：选择和使用合适的凝质可视化系统

结果是有问题的，这是一种紫外透光透光器。它通过将紫外线穿过染色凝胶，以简单的方式读取DNA、RNA或蛋白质带。操作员随后可以检查凝胶、拍照，或剪下所需的带子以便后续处理。

大多数问题除了电源开关外，都与其他问题有关。这些问题是由于波长不正确、光线和污渍不兼容、曝光时间过长以及缺乏紫外线防护造成的。

良好的紫外透照器工作流程应能提供清晰的条带，仅对样品和使用者的最低限度曝光。

紫外透光器的工作原理

凝胶随后被电泳，留下通常肉眼看不到的分子片段。一种附着在待染色材料上或与其相互作用的荧光染色剂。染色凝胶随后被转移到发光表面，染料被紫外线激发，发出肉眼可见的荧光。

深色背景和明亮的区间可以让你估算片段大小、比较样品强度、检查扩增产物或寻找凝胶提取材料。

市面上有多种紫外透光器，标准波长为254、302和365纳米。有些只提供单一波长，有些则有两个或三个波长;哪种方式最好取决于仪器类型和所需波长。凝体观测和电泳应用利用了接近302纳米的广泛紫外线。

选择实际应用的波长

荧光强度、样品损伤程度和染色兼容性受波长选择影响。

在观察荧光染色的DNA和RNA凝胶时，通常使用302 nm光源，因为它通常能产生高强度信号，并且许多已知的核酸染色剂可用于该光源。一个简单的例行凝胶检查和文档解决方案。

如果减少紫外线引起的DNA损伤比最强信号更重要，则可考虑使用接近365纳米的长波紫外线。Thermo Fisher建议尽量减少DNA暴露，并建议如果能从凝胶中提取DNA，应使用更长波长（约360纳米）。

使用近254纳米的短波紫外线进行DNA凝胶常规观察不应被视为自动，尽管有些实验室透光器可用。根据荧光材料和实验室应用，其适用性取决于。

因此，最大波长并不是最有效的选择。它是最适合染色剂且能保持样品状态以备下一步的。

用不同颜色的凝胶染色剂来配合不同颜色的光源

透光器和凝胶染色应被视为一个光学系统。

染料有不同类型，激发和发射特性各不相同。染色剂可能有高紫外线反射率，而蓝光反射率低，反之亦然。相机滤光片还应允许发射的荧光通过，防止不必要的激发辐射通过。

在进行新检测之前：

• 激发染色剂的波长是lequel。激发染色剂的波长是“luequels”。
• 是否使用摄影滤镜的决定将由摄影师本人决定。
• 染色物质的属性（DNA、RNA或蛋白质）
• 如果凝胶是否要切割，如何记录？
• 如果光源是新技术，是否有利用现有成像系统捕捉光源的方法？

例如，SYBR Safe 染色凝胶可以用适当的荧光设备搭配紫外线或蓝光滤镜成像——用于乙溴化物成像的滤镜可能不适用。

如果图像太暗，并不一定意味着凝胶中的DNA太少。原因可能是激发波长不合适、相机滤镜错误、使用过时的紫外线灯或室内光线过多。

如果DNA损伤会被恢复，应限制紫外线暴露

核酸容易受到紫外线的损伤。如果研究人员希望从凝胶中提取DNA带，并将剩余DNA用于后续应用，如克隆、连接、测序或其他应用，这一点尤为重要。

长时间暴露可能导致DNA被划伤及其他损伤，进而影响回收DNA的质量。Thermo Fisher指出，长时间暴露在紫外线下可能导致DNA损伤，进而影响后续应用，如亚克隆。

如果需要进行紫外可视化：

1. 在开灯前，先设置好切削工具和收集管。
   1. 设置最低档，这样才能产生清晰的条纹。
   1. 应尽量减少暴露。
   1. 如果可能的话，考虑紫外线的波长更长。
   1. 不要反复观看同一个凝胶。
   1. 记下所选的频段并关闭源头。

兼容克隆的蓝光透照器可能更适合特别敏感的克隆工作。蓝光可以激发颜色，且研究发现蓝光对DNA的损伤较小。

检查照明均匀性

透光灯应为观看区域提供均匀的照明。

如果表面一侧比另一侧更强，则相同的带状物强度会根据它们在凝胶上的位置而变化。当同一实验室比较通道和/或使用图像进行半定量分析时，这一点尤为重要。

均匀性受灯具状况、灯具排列、滤光片、表面清洁度及仪器光学设计的影响。均匀照明在UVP的背景下对于实现不同波段和通道结果的重复性非常重要。

在决定弹带强度之前，一定要检查背景，看看它是否均匀分布在整个凝胶中。将同一凝胶转移到表面的不同部位可能有助于产生照明问题。

使用正确的观看区域

表面照射的区域应足够覆盖凝胶，但不会占用额外的工作台空间。

少量细胞对标准迷你凝胶来说很不错。更大的平台更适合大尺寸胶片，或者多片并排。市面上有商业系统，配备不同照明区域，通常尺寸约为20 x 20厘米及以上。

所有凝胶都应该是平铺在表面。保护膜上的皱褶、缓冲过多或托盘不均，可能导致条带反射和模糊。

确保观察面清洁;只使用与紫外线滤镜兼容的材料和清洁剂。图像可能会受到划痕、污渍或干涸缓冲沉积物的影响。

确保用户免受紫外线照射

紫外透照灯不是标准的观光灯，而是一种高强度的光源，专为实验室使用而设计。

直接或间接暴露于紫外线辐射都可能导致眼睛和皮肤损伤。斯坦福实验室的安全指南列出了使用透光灯的注意事项：控制对透光器的使用权限，避免反光表面接近透光镜，并张贴指示牌，说明皮肤和眼睛应受保护。

务必使用仪器附带的保护盖、防护罩或封闭式成像柜。需要使用凝胶的实验室操作可能需要遮盖面部、戴手套、穿固定实验外套并用紫外线阻断剂覆盖皮肤。

不要以为普通安全眼镜能阻挡紫外波长。请佩戴专门为该仪器指定的防护装备，并遵守实验室的辐射安全规则。

采用带有安全联锁的密封胶片记录系统，比在开放的灯箱上操作更佳的曝光控制。有些系统在紫外线模式下不允许打开成像门。

教育者应建立一致的观看工作流程

有一个简单的路径可以用来最小化不必要的变异：

• 电泳与染色 1. 电泳与 1 染色。
• 确保染色的波长正确。
• 确保凝胶托盘外部干净干燥。
• 选择所需的紫外线波长和强度。
• 把凝胶放在中央的观景区。
• 关闭保护罩/成像外壳。
• 尽可能缩短曝光时间以产生可见的条纹。
• 用合适的发射滤镜拍摄照片。
• 移动凝胶时关闭紫外线灯。
• 使用后擦拭表面。

如果进行多个实验，染色浓度应保持一致，成像滤镜、曝光时间、强度设置和相机条件也应保持一致。

将透光器插入成像工作流程

如果用户不需要检查凝胶，可以使用台面透光器。对于要求更高的应用，需要完整的胶片记录系统，包括相机、暗箱、滤镜和图像分析软件。

集成系统可用于图像采集、条带测量、文档记录和常规凝胶分析。Bio-Rad特性化了凝胶记录平台，具备受控照明和自动图像采集和分析软件。

决定取决于实验室打算如何处理这张图像。在研究实验室中，教学实验室可能需要清晰的视觉确认，研究实验室可能需要可追溯的图像文件、一致的曝光以及定量的频段分析。

永远不要拆除光源

即使紫外线灯看起来开着，随着时间推移它们的输出也会逐渐减少。强度降低后，操作员会增加曝光时间，这可能导致一致性降低，样品暴露量增加。

请遵循制造商的灯具维护指南。紫外辐射计比目视估计更为客观，UVP已确定辐射度测量是监测紫外光源使用寿命的合适方法。

如果建议更换灯具，彻底清洁观光滤镜，并注明维护日期。荧光紫外线灯也可能含有汞，应根据当地规定处理并作为有害废弃物处理。

结论

使用紫外透照器进行凝胶可视化时，可以快速且清晰地完成，但不能仅在紫外线下明亮才能获得良好效果。

波长应适合染色剂及其后续用途。照明应尽可能均匀，曝光时间应尽可能短，相机滤光片应与发射的荧光相同，用户应受到光源紫外线的保护。

合适的仪器应考虑凝胶尺寸、染色方法、成像要求、样本回收流程以及实验室环境的安全控制。

常见问题解答

问题1。 紫外线透光器是用来做什么的？

它主要用于在电泳凝胶中观察染色的荧光标记DNA、RNA或蛋白质带。它也可以被纳入凝胶记录系统中。

问题2。 以下哪种波长是DNA凝胶常用的？

中波紫外线（约302纳米）常见的用途是常规观察凝胶。最终的选择应与染色相同，下游的涂抹方式也应相同。

问题3。 紫外线会改变DNA吗？

是的。长时间暴露可能导致DNA损伤，降低DNA及其后续应用的克隆性。

问题4。 蓝光和紫外线灯哪个更有效？

如果担心紫外线损伤和/或DNA损伤，建议使用蓝光处理兼容染色。即使是已知的污渍，紫外线也可能带来更好的激发效果。

问题5。 为什么凝胶带会有弱点？

这很可能是由于样品浓度低、染色不当、波长或滤光片不合适、灯泡老化、背景光过多或染色不良所致。